همسانه سازی ژن گلوتامات دکربوکسیلاز باکتری اسید لاکتیک و ساخت وکتور بیانی آن

گاما آمینوبوتیریک اسید(گابا) یک اسیدآمینه غیر پروتئینی است که به عنوان یک نوروترانسمیتر مهاری در بافت مغز پستانداران عمل می کند. گابا چندین عملکرد فیزیولوژیکی مشتمل بر انتقال دهنده عصبی، اثرات کاهندگی فشار خون و مدری دارا می باشد. اگر گابا خوراکی در مقادیر مناسب به مغز برسد، گابا به عنوان یک آرامبخش اثر می کند. گابا به عنوان یک نوروترانسمیتر پالس های عصبی را بلوکه می کند و انتقال عصبی را کاهش داده و می تواند اضطراب و افسردگی را تحت تاثیر قرار دهد. در انسان، گابا به وسیله 2 ایزوفرم از آنزیم گلوتامات دکربوکسیلاز وابسته به پیریدوکسال فسفات تولید می شود. بعضی از باکتری ها مثل سویه های لاکتوباسیلوس، قادر به تولید گابا هستند. دراین تحقیق، تولید گابا توسط سویه-های لاکتوباسیلوس جدا شده از ماست، مطالعه شد. بررسی های فیلوژنتیک مبتنی بر توالی 16srdna و مطالعات بیوشیمیایی نشان داد که آن ها متعلق به جنس لاکتوباسیلوس برویس هستند. این سوش ها در محیط کشت mrs حاوی 1% اسید گلوتامیک در 30 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت کشت داده شدند و سپس تولید گابا با روش hplc بررسی شد. قطعه dna حاوی ژن gad از ncbi بدست آمد. برای همسانه سازی ژن gad از این سویه ها، pcr با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده با اولیگو6 انجام شد. محصول pcr از ژل استخراج شد و در وکتور pgem-t توسط لیگاز t4 ، الحاق شد و به داخل باکتری ای کولای xl1blue ترانس فورم شد. سپس کلنی های سفید انتخاب شده و پس از استخراج پلاسمید و برش با آنزیم های محدود کننده، ژن gad به یک وکتور pet الحاق شد و در باکتری ای کولای bl21 ترانس فورم شد. ژن gad در باکتری های ای کولای بیان شد. نتایج این مطالعات نشان داد که این سویه ها را می توان در صنعت برای تولید گابا به کار برد. در نهایت چنین سویه هایی می-توانند سرعت تولید غذاهای تخمیری آرامبخش را افزایش دهند. کلمات کلیدی: گابا، گلوتامات دکربوکسیلاز، لاکتوباسیلوس، همسانه سازی، hplc